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系统配置要求
SAW分析软件包在Linux系统上被解压和安装,计算环境需满足下列基本要求:
- 8-core Intel or AMD processor (>24 cores recommended)
- 128GB RAM (>256GB recommended)
- 1TB free disk space or higher
- 64-bit CentOS/RedHat 7.8 or Ubuntu 20.04
软件下载
SAW 8.0.2 (7月, 2024)
Download for Linux 64-bit (tar.gz) | |
File size: 3.0 GB | md5sum: 0ca72ea8d7a990fdcf0ff88063ad2f77 |
##wtih curl
curl -o saw-8.0.2.tar.gz "https://cdn-newfile.stomics.tech/saw-8.0.2.tar.gz"
##or with wget
wget -O saw-8.0.2.tar.gz "https://cdn-newfile.stomics.tech/saw-8.0.2.tar.gz"
相关软件(StereoMap)兼容
- StereoMap >= v4.0 (历史版本的适配兼容信息)
SAW-8.0 软件亮点
- SAW本次更新以单体可执行程序
.tar.gz
文件的形式发布,可以直接在系统上解压,无需额外配置计算环境。由于它已经集成并预编译所有内置软件所需的依赖项,因此可以在大多数Linux环境直接运行。- 整合并简化流程使命令编写和完成分析变得更加便捷。这些流程模块包括:
SAW count
:核心流程模块,用于根据计算基因表达读数和Stereo-seq芯片生成表达矩阵。SAW makeRef
:根据参考基因组数据构建索引文件。SAW checkGTF
:检查注释文件的格式。SAW realign
:使用手动处理的文件重新启动分析。SAW reanalyze
:重新执行下游分析。SAW convert
:支持文件格式转换。- SAW支持从FFPE(formalin-fixed paraffin-embedded)样本中获取基因表达信息。在运行
SAW count
时,通过将--kit-version
设置为"Stereo-seq N FFPE V1.0"
来实现。对于FFPE分析,需要使用SAW v8.0.0或更高版本。- 基于 FFPE 组织样本,可以在运行
SAW count
时通过使用--microorganism-detect
参数来开启微生物分析,需要准备必要的参考数据集。更多信息请参阅参考基因组准备。- SAW还升级了读取比对和注释的生物信息学工作流程,以适应FFPE数据集。
- 在注释过程中,默认情况下会同时使用唯一比对 reads 和 多比对 reads 中的最优比对进行基因定量分析。如果分析人员只关注唯一比对 reads,可以使用
--uniquely-mapped-only
参数。- 新的空间基因表达矩阵通过唯一基因ID进行标识,同时依然记录基因名称信息。
- 在图像相关的分析部分,软件对图像处理性能进行了优化。同时,在运行
SAW count
时,支持以TIFF格式直接输入显微镜拼接大图图像。- SAW 分析中新增了基于 Leiden 聚类进行的差异表达分析,marker features 被记录在AnnData格式的 H5AD 和 CSV 文件中,并在HTML报告和StereoMap中展示。
- HTML 报告中的图表是交互式的,新增微生物分析页面,增加了 marker features 结果表格。
- 重新整理输出目录结构,使得结果文件更加清晰易查找,并将中间环节文件和日志放入指定的文件夹中。
- 输出可视化压缩文件
visualization.tar.gz
,其中包含.stereo
统领文件,用于记录 SAW 分析流程的基本信息和 StereoMap 所需的字段信息。
解压安装
SAW 此版本为单体可执行程序的.tar.gz
文件,可以直接在系统上解压,无需额外配置计算环境。由于它已经集成并预编译所有内置软件所需的依赖项,因此可以在大多数Linux环境直接运行。
下载 SAW 软件包并解压到合适的目录位置,文档示例假设 /saw/package
为运行目录。
$ cd /saw/package
[download the SAW package tar.gz from the Software download part]
$ tar -xzf saw-8.0.2.tar.gz
注意,参考基因组和 demo 数据集需要单独下载。
参考基因组下载
STOmics 研发团队已预先构建了可直接使用的参考基因组索引文件。
STAR 索引文件
Index file | Description | File information |
---|---|---|
reference-data-mouse.tar.gz | Mouse reference for STAR alignment, including genome file, annotation file and index files. | File size: 27.84GB md5sum: 67c79da93b3575b31c7a97fe6e2f17f0 |
reference-data-mouse-rRNA.tar.gz | Mouse reference with rRNA information for STAR alignment, including genome file, annotation file and index files. | File size: 28.03GB md5sum: 6fa47b14dc26321d1cab691baee4fb2f |
reference-data-rat.tar.gz | Rat reference for STAR alignment, including genome file, annotation file and index files. | File size: 27.55GB md5sum: 92dc19ab97b5ad1a16f3f1dfd34cd642 |
reference-data-human.tar.gz | Human reference for STAR alignment, including genome file, annotation file and index files. | File size: 31.20GB md5sum: 881b966dcd3e253cdf5ef5c36ec588dc |
reference-data-human-rRNA.tar.gz | Human reference with rRNA information for STAR alignment, including genome file, annotation file and index files. | File size: 31.47GB md5sum: a86ceda324fa300d18f48b77502e5274 |
##with curl
#mouse
curl -o aspera_download.key -s ftp://ftp.cngb.org/pub/Tool/Aspera/aspera_download.key && ascp -i aspera_download.key -P 33001 -T -k 1 -l 100m "aspera_download@183.239.175.39:/pub/stomics/STT0000124/supp/reference-data-mouse.tar.gz" ./
#mouse with rRNA
curl -o aspera_download.key -s ftp://ftp.cngb.org/pub/Tool/Aspera/aspera_download.key && ascp -i aspera_download.key -P 33001 -T -k 1 -l 100m "aspera_download@183.239.175.39:/pub/stomics/STT0000124/supp/refer
ence-data-mouse-rRNA.tar.gz" ./
#rat
curl -o aspera_download.key -s ftp://ftp.cngb.org/pub/Tool/Aspera/aspera_download.key && ascp -i aspera_download.key -P 33001 -T -k 1 -l 100m "aspera_download@183.239.175.39:/pub/stomics/STT0000124/supp/reference-data-rat.tar.gz" ./
#human
curl -o aspera_download.key -s ftp://ftp.cngb.org/pub/Tool/Aspera/aspera_download.key && ascp -i aspera_download.key -P 33001 -T -k 1 -l 100m "aspera_download@183.239.175.39:/pub/stomics/STT0000124/supp/reference-data-human.tar.gz" ./
#human with rRNA
curl -o aspera_download.key -s ftp://ftp.cngb.org/pub/Tool/Aspera/aspera_download.key && ascp -i aspera_download.key -P 33001 -T -k 1 -l 100m "aspera_download@183.239.175.39:/pub/stomics/STT0000124/supp/reference-data-human-rRNA.tar.gz" ./
##with wget
#mouse
wget -c ftp://ftp.cngb.org/pub/stomics/STT0000124/supp/reference-data-mouse.tar.gz
#mouse with rRNA
wget -c ftp://ftp.cngb.org/pub/stomics/STT0000124/supp/reference-data-mouse-rRNA.tar.gz
#rat
wget -c ftp://ftp.cngb.org/pub/stomics/STT0000124/supp/reference-data-rat.tar.gz
#human
wget -c ftp://ftp.cngb.org/pub/stomics/STT0000124/supp/reference-data-human.tar.gz
#human with rRNA
wget -c ftp://ftp.cngb.org/pub/stomics/STT0000124/supp/reference-data-human-rRNA.tar.gz
下载索引文件并将其解压到合适的位置。这里假设将 /saw/reference 设置为操作目录。
$ cd /saw/reference
[download the mouse referencetar.gz from the reference download part]
$ tar -xzf reference-data-mouse.tar.gz
Bowtie2 索引文件
Index file | Description | File information |
---|---|---|
reference-data-mouse-rRNA-Bowtie2.tar.gz | Mouse reference with rRNA information for Bowtie2 alignment, including genome file and index files. | File size: 3.89GB md5sum: 2c8dd1293390009ba2a10cb28d757a74 |
reference-data-human-rRNA-Bowtie2.tar.gz | Human reference with rRNA information for Bowtie2 alignment, including genome file and index files. | File size: 4.32GB md5sum: 3fcc26c8df319706634514e8e5b17d73 |
##with curl
#mouse for bowtie2
curl -o aspera_download.key -s ftp://ftp.cngb.org/pub/Tool/Aspera/aspera_download.key && ascp -i aspera_download.key -P 33001 -T -k 1 -l 100m "aspera_download@183.239.175.39:/pub/stomics/STT0000124/supp/reference-data-mouse-rRNA-Bowtie2.tar.gz" ./
#human for bowtie2
curl -o aspera_download.key -s ftp://ftp.cngb.org/pub/Tool/Aspera/aspera_download.key && ascp -i aspera_download.key -P 33001 -T -k 1 -l 100m "aspera_download@183.239.175.39:/pub/stomics/STT0000124/supp/reference-data-human-rRNA-Bowtie2.tar.gz" ./
##with wget
#mouse for bowtie2
wget -c ftp://ftp.cngb.org/pub/stomics/STT0000124/supp/reference-data-mouse-rRNA-Bowtie2.tar.gz
#human for bowtie2
wget -c ftp://ftp.cngb.org/pub/stomics/STT0000124/supp/reference-data-human-rRNA-Bowtie2.tar.gz
Kraken2 索引文件
Index file | Description | File information |
---|---|---|
Taxonomy reference for Kraken2 alignment. | File size: 48.47GB md5sum: 46e56a6d2707066758574d203579d1d9 |
##with curl
# kraken2 database
curl -o aspera_download.key -s ftp://ftp.cngb.org/pub/Tool/Aspera/aspera_download.key && ascp -i aspera_download.key -P 33001 -T -k 1 -l 100m "aspera_download@183.239.175.39:/pub/stomics/STT0000124/supp/reference-data-pluspf-20220908-Kraken2.tar.gz" ./
##with wget
#mouse
wget -c ftp://ftp.cngb.org/pub/stomics/STT0000124/supp/ProteinPanel_128_mouse_V2.list
#human
wget -c ftp://ftp.cngb.org/pub/stomics/STT0000124/supp/ProteinPanel_163_human_V2.list
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