Q
时空转录组+多重免疫荧光技术中,摸索透化时间的实验,不添加一抗和二抗,是否会影响转录组实验的透化时间的确定?
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A
经过测试一抗、二抗添加与否并不影响透化时间的判断,只需要模拟前面的试剂孵育流程即可。
Q
时空转录组+多重免疫荧光的实验中,抗体滴定实验的目的是什么?
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A
主要目的有:(1)确保选择的抗体适配于时空组学的mIF实验,可表达出正确的pattern;(2)根据滴定实验可以判断最佳的抗体浓度。
Q
时空转录组+多重免疫荧光的实验中,不用FcR对染色和后续的捕获会有影响吗?比如只有针对小鼠和人的FcR,没有猴的。
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A
FcR主要封闭非特异性抗原结合的位点,如果不封闭,会与目标抗原非特异性结合而影响目标位点的判断。请登录BioLegend 官网查询是否有针对猴的,或者咨询一下抗体公司。
Q
时空转录组+多重免疫荧光的实验中,准备试剂时,血清、一抗和二抗都需要14000g 离心10 min,离心是原液离心还是稀释后的离心,离心的目的是什么?
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A
主要目的是去除杂质,因为试剂中含有杂质,所以要离心。按照试剂盒使用说明书操作即可。