Q
对于时空转录组FFPE 生化流程第三方物料中，可否使用自行配制的试剂TE buffer(pH 9.0)？能否替换为其他非推荐品牌货号试剂？
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A
1、不建议使用自行配制的TE buffer (pH 9.0)。
2、建议直接使用推荐的品牌货号试剂，不建议使用其他非推荐品牌。
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对于FFPE的样本，拍照前盖玻片封片后发现有气泡存在，可以取下盖玻片重新封片操作吗？
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Q
在进行时空转录组FFPE的生化流程中，对切片进行捞片的时候，如果没贴好能重新贴吗？
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建议在漂片的时候观察组织形态，如果没有贴牢固，放回液体后切片飘起来了可以重新贴片，如果已经与芯片贴牢固，不能飘起来，就不能重新贴片了。
Q
在进行时空转录组FFPE的生化流程中，贴片后进行烤片时（42˚C烤3 hr后37˚C烤片过夜），PCR仪能否换为烘箱？烤片时可以盖PCR仪盖吗？烤片最少需要多久时间？是必须37℃烤片过夜吗？
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1、在进行时空转录组FFPE的生化流程中，贴片后进行烤片时（42˚C烤3h后37˚C烤片过夜），PCR仪可以替换为烘箱。
2、可以盖PCR仪盖进行烤片。
3、烤片时间建议按照说明书进行操作。
Q
时空转录组适用于FFPE骨组织样本吗？如果对骨组织预先进行脱钙处理，对捕获结果会有什么影响？
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1、骨组织是易脱片样本，即便是脱钙处理也会有脱片风险。
2、如果对骨组织预先进行脱钙处理，对捕获率会有一定程度的影响。
Q
进行时空转录组的FFPE样本，推荐的切片厚度是多少？FFPE样本的切片厚度不考虑样本本身细胞的大小吗？切片厚度从5μm下降到4μm对捕获量有影响吗？
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1、对于FFPE样本的切片厚度，一般建议是5μm，但对于脂肪含量高的FFPE样本或者容易脱片的FFPE样本，建议选择4μm的切片厚度。
2、FFPE样本一般是病理组织，经过固定脱水的组织细胞会缩小，所以建议切片5μm厚度，切片厚度也可以根据老师的科研需求自行调整。
3、切片厚度对捕获影响不大，若项目执行有一致性要求可遵循同项目其他样本操作要求即可。
Q
对时空转录组FFPE样本进行质检时，DV200是什么含义？
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FFPE样本质检中DV200 是通过电泳图确定的长度大于200 个核苷酸的RNA 片段的百分比，用于评估FFPE样本的RNA降解程度，DV200比例越低RNA降解越严重，低于30%不建议继续实验。
Q
针对同一样本做时空转录组，应该选用FFPE流程还是FF流程？
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1、如果能够获得新鲜样本来进行包埋，建议优先使用FF流程，不牺牲样本的RNA质量。如果样本是已经包埋好的FFPE样本，那只能选用FFPE流程。
2、如果比较关注微生物表现和非编码RNA，可以优先考虑FFPE流程。
Q
在进行时空转录组FFPE的生化实验中，封片剂加多会有什么影响？可以用其他封片剂替代吗？
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A
1、封片剂过多可能会导致盖玻片产生一定程度上的滑动，不建议加入过多的封片剂；
2、提供的试剂盒中已经包含了封片剂，不建议更换其他封片剂。
Q
在进行时空转录组FFPE的生化实验中，使用的脱蜡剂是二甲苯吗？
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A
不是，目前针对时空转录组FFPE生化实验脱蜡这一步使用的是环保型的脱蜡剂，但有味道，建议在通风橱使用该试剂。
